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利用eXtended Performance(XP)色谱柱改进美国药典(USP)噻康唑有机杂质分析方法

2013-1-22 10:31:00
核心提示:   利用eXtended Performance(XP)色谱柱改进美国药典(USP)噻康唑有机杂质分析方法 Kenneth D.Berthelette、Mia Summers和Kenneth J.Fountain 沃特世公司,美国马萨诸塞州米尔福德 方案优势 ■使用XP色谱柱改进耗时的USP美国药典有机杂质分析方法,实现更快速的分析并减少溶剂的使用量,同时仍符合美国药典<...

 

利用eXtended PerformanceXP)色柱改美国典(USP有机杂质分析方法
Kenneth D.Berthelette
Mia SummersKenneth J.Fountain
沃特世公司,美国马萨诸塞州米福德
方案优势
使用XP柱改USP美国典有机杂质分析方法,实现更快速的分析并减少溶的使用量,同仍符合美国<621>章指南的定。
品运行时间缩80%,从而提高了生能力。
将溶用量减少90%,降低了运行成本。

沃特世提供的解决方案
ACQUITY UPLC® H-Class

Alliance® HPL
C
XSelect™ CSH™ C18

Empower® 3

eXtended Performance [XP] 2.5 μm
TruView™ LCMS认证最大回收品瓶

键词
美国典方法、ACQUITY UPLC算器、沃特世反相色选择表、仿制

引言
全世界的制在日常工作中都需要仿制中的有机杂质进行分析。使用较为陈旧的器和色柱技术进行有机杂质分析,因需要长时间使用大量的溶,所以既耗费钱。然而通使用著改器和色柱技有机杂质分析会得更高效。2.5μm 粒径的eXtended PerformanceXP)色设计用于高效液相色和超高效液相色柱是改美国典方法的理想选择,因其能使色析工作者实现更小粒径和低散系统带来的利益,同符合美国<621>章色分析指南的定。<621>章列出了允的方法化幅度。

是一种用于治酵母菌感染的咪唑类抗真菌化合物。被转换的方法是有机杂质的分析方法2。有机杂质分析方法用于品中是否存在杂质及其含量。XP柱方法是从最初在HPLC上的色模的美国典方法放至HPLCUPLC器上的。在HPLC器上使用XP对现行美国典方法行改够缩短运行时间,从而提高了常分析实验室的品通量。而在UPLC使用XP可以比HPLC一步短运行时间并减少溶的使用,从而节约成本。

实验条件
Alliance 2695 HPLC
条件
相: 44:40:28/甲醇/水加2 mL氧化
分离模式:等度洗脱
检测 219 nm
柱(L1): XSelect CSH C184.6 x 250 mm5 μm
部件号:186005291XSelect CSH C18 XP4.6 x 150 mm2.5 μm
部件号:186006729XSelect CSH C18 XP4.6 x 100 mm2.5 μm
部件号:186006111
柱温: 25
液: 95:5/
品清洗液: 95:5/
密封冲洗液: 50:50甲醇/
流速:根据方法
进样量:根据方法

ACQUITY UPLC H-Class
条件
相: 44:40:28 /甲醇/水加2 mL氧化
分离模式:等度洗脱
检测 219 nm
柱(L1): XSelect CSH C18 XP4.6 x 150 mm2.5 μm
部件号:186006729XSelect CSH C18 XP4.6 x 100 mm2.5 μm
部件号:186006111XSelect CSH C18  XP2.1 x 150 mm2.5 μm
部件号:186006727
柱温: 25
液: 95:5/
品清洗液: 95:5/
密封冲洗液: 50:50甲醇/
流速:根据方法
进样量:根据方法
数据管理: Empower 3
品描述
100%的甲醇将唑样品制成表1所述的度。将移至一个进样用的TruView最大回收品瓶中(部件号:186005662CV)。

果与讨论
全世界制都需要方法制唑进行日常分析。本要使用美国专论定的有机杂质分析方法,在几种不同格的色柱上对噻及其有关物ABC的分离行了比。因为噻唑许杂质缺乏实际可用性,所以将有关物ABC用作低杂质标准品。美国典所列的有机杂质分析方法用于分析复方。品中多种成分的有效分离通常需要使用更的色柱。使用大填料粒径(≥3.5 μm)的柱会使运行时间,溶使用量增大。例如,最初的美国典中的有机杂质分析需要使用4.6 x 250 mm5 μm的色柱,分离时间长30,每分析一个品需要耗30 mL。但是,使用2.5μm粒径的eXtended PerformanceXP)色柱,可以在短运行时间的同仍然符合考核的要求。由于运行时间缩短,品通量得到了提高,每次分析所需溶减少,从而降低了成本。行的美国<621>章色分析指南定了允的方法化幅度。些允化包括±70%的色化,-50%的粒径化,±50%的流速化。1美国典要求有关物BC的分离度要达到1.5,本:在不同的色柱和不同的色间进行的方法转换完全对这两个分离化合物的苛刻要求。

HPLC器上使用XP行有机杂质分析
的有机杂质分析方法需要使用L1用色柱,为该分离而列出的色柱是LiChrosorb RP-182。参照沃特世反相液相色选择表,本文用更先XSelect CSH C18 固定相色柱。之所以选择XSelect CSH C18柱是由于其与所列出的色柱相似,并且能提供适用于HPLC UPLC器的各种格和粒径。本文首先使用一根XSelect CSH C184.6x250mm5μm柱在Alliance HPLC上运行美国典方法,流速1.0mL/min。如表2所示,本次分离符合考核准。本次分离的运行时间为30,在连续批量分析,将面时间和成本管理的双重挑。如果使用原始的美国典方法, 8的一个工作日能分析16品,要消耗480mL。通使用XP柱,在同8工作日内可分析80品,且需使用240mL著地提高了品通量并降低了运行成本。

在不同的系上使用2.5μm XP柱改准方法具有通用性,同仍符合美国<621>章指南的要求,如1所示。XP柱是一款2.5-μm粒的HPLCUPLC柱,高效填装并能承受UHPLC的高,使XP柱在HPLCUPLC器上均能使用。

要的准方法首先从最初的4.6 x 250 mm5 μm转换4.6 x 150 mm2.5 μmXP柱,用以明使用更小粒径的色柱可以短运行时间。使用更小的粒径可以提高分离能力,用色度与粒径的比L/dp)即可预测。在本例中,L/dp50,000(初始条件)提高到60,0004.6 x 150 mm XP柱)。根据ACQUITY UPLC算器的算,用于XP柱的最佳流速2.0 mL/min3。但是,个流速超出了美国<621>章指南定的化范。故采用1.0 mL/min的流速以保符合美国典指南的定,同也适HPLC的限制。及其有关物在原始色柱上与在4.6 x 150 mm XP柱上的分离行了比,如2A-B所示。4.6 x 150 mm XP柱将运行时间缩43%,分离度提高5%,如2所示。


接着使用一根更短的4.6 x 100 mm2.5 μm XP行分离,用以明在实现更快速分离的同,仍保持着合格的分离度。运行时间于有机杂质分析尤其有用因于附加的分离复性,些方法一般比其他方法具有较长的运行时间。需要注意的一个重要问题是,不一定任何候都会用具有低分离能力(L/dp 40,000)的短色柱。例如在料和杂质洗脱时间很接近的情况下可能需要保持原始的分离能力。2C示了使用4.6 x 100 mm2.5μm XP行分离,与初始条件相比,运行时间缩57%,并且仍然符合所有的考核准,如2所示。在种情况下,L/dp50,000(初始条件)降低至40,000致有关物BC的分离度降低15%;但分离度仍然符合要求,取决于原始分离的复程度。

UPLC器上使用XP行有机杂质分析
1所示,通使用XP柱和ACQUITY UPLC算器,方法可以从Alliance HPLC统转换ACQUITY UPLC H-Class上。更新的器,例如ACQUITY UPLC H-Class,可以实现更快速、更高效的分离,因于其高反耐受能力、进样更快速的平衡以及著降低的系散。HPLCUPLC的分离能力,将2B中所示的使用4.6 x 150 mm2.5 μm粒的 XP行的有机杂质分析方法在ACQUITY UPLC H-Class上重新运行,如3A所示。仅仪器本身的——HPLCUPLC,会使BC峰之的分离度增加5%,使运行时间缩12%,如表2和表3所示。分离度的增大因于UPLC的低系和低散,因为这两个属性都可以改善峰形。



为进一步UPLC器的点,如3B所示在UPLC上使用4.6 x 100 mm XP行分离。此分离操作使BC峰之的分离度从使用HPLC统时1.6(参2)提高到使用UPLC统时1.8(参3)。在UPLC上使用4.6 x 100 mm XP柱,得到与在HPLC上用原始方法分离相同的分离度,但是比原始方法快57%

最后,将准方法转换至一根2.1 x 150 mm 2.5 μm XP柱上。根色柱的测试结明通减小色柱的内径,在保留相同分离度的同一步短运行时间,并且大大减少溶用量。根据ACQUITY UPLC算器的算,适合根色柱的流速0.42 mL/min。但流速超出了美国<621>章指南的要求,因此实验使用符合定的0.5 mL/min流速。分析得到的色谱图(如3C所示)示,如表3所示与原始条件相比运行时间缩80%,而适用性要求仍很容易达到。此外,仅仅减小色柱的内径分析就比使用4.6 x 150 mm XP柱快63%,如3A所示。最后,通使用2.1 x 150 mm XP柱,与原始的准方法相比,溶用量减少90%著地节约了成本。当流速整,以保持在美国<621>章指南定的范BC峰的分离度从1.9下降至1.8,但仍符合考核准。

结论
行既耗费钱的有机杂质分析,在HPLC上使用eXtended Performance [XP] 2.5 μm柱,与原始的美国典方法相比,可以短运行时间和减少溶用量57%。通XP柱与UPLC器相合,运行时间可减少80%,溶用量可减少90%。既能在HPLC器上运行又能在UPLC器上运行的XP柱的用性可以用于在遵循行美国<621>章指南的同,改美国典方法。在常分析实验室中,使用更小粒径色柱改的美国典方法,可节约大量的时间和运行成本。
参考文献
1. USP General Chapter <621>, USP35-NF30, 258. The United States Pharmacopeial Convention, official from August 1, 2012.
2. USP Monograph. Tioconazole, USP35-NF30, 4875. The United States Pharmacopeial Convention, official from August 1, 2012.
3. Jones MD, Alden P, Fountain KJ, Aubin A. Implementation of Methods Translation between Liquid Chromatography Instrumentation. Waters Application Note 720003721en. 2010 Sept.
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