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供应商: 上海悦克生物科技有限公司
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参考价格: 360 元
销售区域: 全国
使用范围: 仅为制药设备或原料、科研使用,不能直接做用于人
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销售地区: 全国 价格: 360 元
产品特性: 上海悦克生物科技有限公司
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上海悦克生物科技有限公司                                     Lot#YK-2009-1
Protein A/G-Plus Beads使用说明书
 

【产品简介】
本产品Protein A/G-Plus Beads是将重组Protein A/G蛋白分子共价交联到4%琼脂糖胶粒上,再使用特殊试剂对琼脂糖胶粒表面进行后处理,降低了胶粒对杂蛋白的非特异性吸附。Protein A/G-Plus Beads 分散在含有0.01%叠氮化钠的PBS缓冲液中,用于免疫沉淀(IP)以及免疫共沉淀(Co-IP)研究。2 ml包装内含有0.5 ml Beads,可进行100次常规的免疫沉淀试验。
【使用说明】
A.样品的制备:
1.         对于100 mm培养皿中的贴壁细胞,吸除细胞培养液,使用预冷PBS洗涤一次后加入2毫升细胞裂解液裂解细胞。对于组织样品参考贴壁细胞使用裂解液的比例进行裂解。对于悬浮细胞,离心收集细胞后,PBS洗涤一次,然后参考贴壁细胞的裂解方法进行裂解。
注:详细的裂解方法参考不同裂解液的详细使用方法。对于不同的培养器材,参考100 mm培养皿的裂解液的用量进行裂解。裂解液最终蛋白浓度选择在0.5-1 μg/μl范围内,较为合适。
B.去除非特异性结合(可省略):
2.         取200微升至1毫升蛋白样品,加入约1微克和免疫沉淀时使用的IgG种属相同的普通IgG(nomal IgG)和20微升充分重悬的Protein A/G-Plus Beads,4℃缓慢摇动30分钟。
3.         2500rpm(约1000 g)离心5分钟,取上清用于后续的免疫沉淀。
注:现在已经知道,哺乳动物细胞内有多种成分可以和IgG发生结合,可能会在后续免疫印迹中出现非特异性条带。使用normal IgG和Protein A/G-Plus Beads对裂解液预处理,可以降低非特异性吸附。
C.免疫沉淀:
4.         加入0.2-2微克用于免疫沉淀的一抗,4℃缓慢摇动1小时。
5.         再加入20微升充分重悬的Protein A/G-Plus Beads,4℃缓慢摇动1-3个小时。(为方便后续的洗涤操作可以把加入充分重悬的Protein A/G-Plus Beads的量调整为40微升。)
6.         2500rpm(约1000g)离心5分钟,或瞬时高速离心,小心吸除上清,注意宁可留下少量上清也不能吸掉Protein A/G-Plus Beads。
7.         用准备蛋白样品时的裂解液或PBS洗涤沉淀4次,裂解液或PBS的用量每次为0.5-1毫升。洗涤时离心条件和吸除上清的要求同上面的步骤3。
8.         完成最后一次洗涤后,去除上清,加入20-40微升1XSDS-PAGE电泳上样缓冲液Vortex重悬沉淀,瞬时高速离心把样品离心至管底。
9.         100℃或沸水浴处理3-5分钟,取部分或全部样品用于SDS-PAGE电
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