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GST-resin

产品货号:
供应商: 上海悦克生物科技有限公司
产品产地:
品牌: york
参考价格: 280 元
销售区域:
使用范围: 仅为制药设备或原料、科研使用,不能直接做用于人
产品参数
产品名: GST-resin
英文名:  
型号/货号:
产地: 商标:
销售地区: 价格: 280 元
产品特性: GST-resin 纯化柱系采用进口填料分装而成,性质稳定,重复性好,使用简单、方便。胶粒平均直径60微米,比表面积大,结合大肠杆菌重组GST蛋白的能力大于8 mg/ml。可以满足大多数实验室级别小量纯化GST融合蛋白的需求。
信息有效期: [长期有效]    [更新时间:2009-10-25 15:06:19 ]
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GST-resin 使用说明书
 
一、简介:
GST-resin 纯化柱系采用进口填料分装而成,性质稳定,重复性好,使用简单、方便。胶粒平均直径60微米,比表面积大,结合大肠杆菌重组GST蛋白的能力大于8 mg/ml。可以满足大多数实验室级别小量纯化GST融合蛋白的需求。
二、使用方法:
1.         离心收集250 ml表达目标蛋白的大肠杆菌,冻融或超声破菌于10-15 ml破菌缓冲液。破菌缓冲液: 20-50 mM Tris-HCl,pH 7.5-8.5,含0.25 M NaCl,其它常用缓冲液为PBS。这一步可以适当加入EDTA,PMSF等蛋白酶抑制剂。
2.         离心取上清,上样于预先平衡好的纯化柱,通常自然流速可以很好结合。少数情况下,流速过慢,可以使用硅胶管控制上样速度。
3.         样品上完以后,使用破菌缓冲液洗柱10-20个柱体积,注意将纯化柱侧壁上的残留样品洗干净。
4.         使用2-4 ml洗脱缓冲液将样品从GST-resin纯化柱上洗脱。洗脱缓冲液:破菌缓冲液中补加新配制还原型谷胱甘肽(GSH)到终浓度6 mM,10 mg GSH干粉可配制5 ml洗脱缓冲液。
5.         纯化结束以后,使用20倍柱体积1% 醋酸冲洗纯化柱,再使用PBS/TBS平衡pH,大量纯水洗柱,最后加入5 ml 20%乙醇,保存在4 ℃,不要在-20 ℃冻结,仔细保存可以让一根柱子反复使用。
三、补充说明:
1.         在未知GST融合蛋白稳定性的情况下,整个纯化过程最好在4℃完成,可以使用蛋白酶抑制剂防止降解。此外,可以使用非离子去垢剂改善结合,具体使用浓度参考以下:1% Triton X-100,1% Tween-20,1% CTAB,10 mM DTT,0.03% SDS,0.1% NP-40。
2.         最好不同的融合蛋白使用不同的柱子,每根1ml的GST-resin亲和柱一次可以结合大约10 mg GST融合蛋白,样品较多,可以使用多根柱子。
3.         如果GST融合蛋白是包涵体形式,那么只有做了复性以后,才可以使用GST-resin纯化,通常的复性过程耗时、耗力,并不容易成功。
4.         洗脱缓冲液中的GSH浓度不要太高,否则会改变洗脱缓冲液的pH,通常4-10 mM就足够了。
5.         可以使用在柱酶切的方法,得到去除GST的目标蛋白。经常使用的酶包括:Thrombin;Enterokinase;TEV protease;PPase等。我们推荐TEV protease和PPase,因为这两种酶的特异性较好,都是带有Tag的重组酶,方便除去。其中PPase是和PGEX-6p-1载体配套的酶,效果很不错,欢迎尝试。
6.         洗脱的缓冲液中含有高浓度的GSH,可能影响后续的实验。可以使用超滤管或者脱盐柱进行除去。
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