产品信息
[产品供应]

ABIzol(总RNA提取试剂)

产品货号: ABIGEN
供应商: 北京艾比根生物科技有限公司
产品产地: ABIGEN
商标: ABIGEN
品牌: ABIGEN
参考价格: 询价
销售区域:
使用范围: 仅为制药设备或原料、科研使用,不能直接做用于人
产品参数
产品名: ABIzol(总RNA提取试剂)
英文名: ABIzol(总RNA提取试剂) 
销售分类: RNA提取试剂盒 型号/货号: ABIGEN
产地: ABIGEN 商标: ABIGEN
销售地区: 价格: 询价
产品特性: ABIGENABIzol试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。加入氯仿后离心,样品分成水样层和有机层。
信息有效期: [长期有效]    [更新时间:2011-7-21 9:40:19 ]
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ABIzol(总RNA提取试剂)
 适用范围:
适用于各种动植物组织/细胞总RNA、DNA、蛋白的快速抽提
 产品储存:
ABIzol 在室温下能稳定保存12个月。尽管如此,为达到最佳效果,我们建议保存在2~8°C的环境下。
 重要提示:
有毒物接触皮肤或者不慎吞服,会导致灼伤。一旦接触皮肤后立即以大量的洗涤剂和清水清洗。若感不适,看医生并寻求***酚和其他成分的正确治疗方案。
 产品介绍:
ABIzol试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。加入氯仿后离心,样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后,RNA可以通过异丙醇沉淀来还原。在除去水样层后,样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA,在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。共纯化DNA对于样品间标准化RNA的产量十分有用。
 注意事项:
1. 当ABIzol 用量少于2ml时建议使用清洁的一次性的聚丙材质试管。
2. 当ABIzol 用量较大时,可以使用玻璃试管(Corex)或聚丙材质试管,事先检验以确保该试管可以耐受加入ABIzol 和氯仿后12,000×g的离心力。不可使用有裂缝或者破损的试管。


 RNA抽提操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
实验所需试剂但未提供的物品:
1. 氯仿  ,异丙醇 ,75%乙醇(用DEPC处理过的水配制)
2. 无RNA酶的水或0.5% SDS溶液调配无RNA酶的水——将水加入无RNA酶的玻璃瓶中,加入DEPC至0.1% (v/v)。放置过夜并高压灭菌。匀浆化作用
a. 组织
用glass或强力匀浆器搅匀组织样品,每50~100mg组织加1ml的ABIzol。匀浆化时组织样品容积不能超过ABIzol 容积的10%。
b. 单层生长的细胞
直接往直径3.5 cm的培养板中加入1ml的ABIzol 溶解细胞,通过移液管分次移出细胞裂解物。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的ABIzol 量(每10cm2加1ml)。当ABIzol 量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。
c. 悬浮生长的细胞
通过离心来沉淀细胞。在ABIzol 试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每5~10×106的动物细胞,植物或酵母菌细胞或每1×107细菌加1ml的ABIzol。在加入ABIzol 前应避免洗涤细胞,因为那样会增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和细菌可能需要使用匀浆器。
可选方案: 当样品富含蛋白质,脂肪,多糖或是细胞外物质例如肌肉,脂肪组织和植物的块茎部分时可能需要一额外的分离步骤。匀浆化后在2~8°C的条件下以12,000×g的离心力离心10分钟,移除匀浆中不溶解的物质,余下的沉淀中包含有细胞外膜,多糖,以及高分子量DNA,而上层的超浮游物含有RNA。在来自于脂肪组织的样品中,大量的脂肪漂在最上层因而应该除掉。在每一个个案中,将清亮的匀浆溶液转移到一干净的试管中加入氯仿并继续进行下述的分离步骤。
2. 分离阶段
将匀浆样品在15 -30°C条件下孵育5分钟以使核蛋白体完全分解。每1ml ABIzol加0.2ml氯仿。盖紧样品管盖,用手用力摇晃试管15秒并将其在室温下孵育2~3分钟。在2~8°C下以不超过12,000×g的离心力高速冷冻离心15分钟。离心后混合物分成三层:下层***酚-氯仿层,中间层,上层无色的水样层。RNA无一例外地存在于水样层当中。水样层的容量大约为所加ABIzol 容量的60%。
3. RNA的沉淀
将水样层转移到一干净的试管中,如果希望分离DNA和蛋白,有机层同样要予以保留。通过将水样层和异丙醇混合来沉淀RNA。最初均化时的每1ml ABIzol 对应0.5ml异丙醇。将混合的样品在15 -30°C条件下孵育10分钟并在2~8°C下以不超过12,000×g的离心力高速冷冻离心10分钟。RNA沉淀在离心前通常不可见,形成一胶状片状沉淀附着于试管壁和管底。
4. RNA的漂洗
移去上层悬液。用75%的乙醇洗涤RNA沉淀一次,每1ml的ABIzol 至少加1ml的75%乙醇。旋涡振荡混合样品并在2~8°C下以不超过7,500×g的离心力高速冷冻离心5分钟。
5. RNA的再溶解
在操作的最后,简单干燥RNA沉淀(空气干燥或真空干燥5~10分钟)不要在真空管里离心干燥RNA。尤为重要的是,不能让RNA沉淀完全干燥那样会极大地降低它的可溶性。部分溶解的RNA样品其A260/280比值<1.6。用移液管尖分几次移取无RNA酶的水或0.5%SDS溶液来溶解RNA(当RNA以后要用于酶切反应时,避免使用SDS。)RNA还能被100%甲酰胺(除去离子)再溶解并保存在–70°C。
 

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